- 產(chǎn)品品牌： REAGEN
- 產(chǎn)品貨號： RN095FP
- 產(chǎn)品規格： 50/100T
- 產(chǎn)品適用： 本試劑盒適用于定性檢測男性尿道、女性宮頸分泌物拭子中淋球菌核酸。
- 產(chǎn)地來(lái)源： 深圳
- 保質(zhì)期： 12個(gè)月
【產(chǎn)品名稱(chēng)】
通用名稱(chēng)：淋球菌核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)
【包裝規格】
96人份/盒
【預期用途】
本試劑盒適用于定性檢測男性尿道、女性宮頸分泌物拭子中淋球菌核酸。
【檢驗原理】
本試劑盒采用聚合酶鏈式反應（PCR）結合Taqman技術(shù)，對淋球菌（Neisseria gonorrhoeae）的特異性DNA核酸片段進(jìn)行熒光PCR檢測。
【主要成分】
組分成分 | 96人份/盒 | 主要成分 | |
規格 | 數量 | ||
PCR反應液 |
1950μL /管 | 1管 | 引物、探針、脫氧核糖核苷三磷酸（dNTP）、緩沖體系 |
酶混合液 | 50μL /管 | 1管 | Taq酶、UDG酶 |
陽(yáng)性對照 | 200μL /管 | 1管 | 含目的片段的質(zhì)粒 |
陰性對照 | 500μL /管 | 1管 | 生理鹽水 |
【儲存條件及有效期】
試劑置于-30~-15℃避光保存，有效期為12個(gè)月。本產(chǎn)品反復凍融應不超過(guò)5次。
【適用儀器】
熒光定量PCR儀：ABI 7500熒光PCR儀.；ABI Quantstudio5 ；Gentier 96R；SLAN-96P全自動(dòng)醫用PCR分析系統。
【樣本要求】
1.適用樣本類(lèi)型：男性尿道、女性宮頸分泌物拭子
2.樣本保存與運送：
上述采集的樣本可立即用于檢測，或2-8℃保存（不超過(guò)24小時(shí)），長(cháng)期保存請置于-20℃。標本運送用冰壺加冰或泡沫箱加冰密封進(jìn)行運輸。
【檢驗方法】
1. 樣本處理
取待測樣本200ul，按照核酸提取試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行核酸提取。
2. 試劑配置（在準備區進(jìn)行，與擴增區分開(kāi)，冰上操作）
注：試劑使用前要完全解凍，使用前渦旋混勻，10000 rpm離心5 s，確保試劑完全離心至管底，否則會(huì )出現裝量差異的現象。
若有N個(gè)待檢測樣本，則需配置N+2擴增反應（待檢樣本數N+1個(gè)陽(yáng)性質(zhì)控品+1個(gè)陰性質(zhì)控品），按下表要求進(jìn)行擴增反應液的配制，配制完成后充分震蕩混勻，10000 rpm離心5 s。按每管20 μl分裝至0.2 ml PCR管中，并做好標記，擴增反應液需現配現用。
N人份(μL) | |
PCR反應液 | （N+2）×19.5 |
酶混合液 | （N+2）×0.5 |
總量 | （N+2）×20 |
3. 加樣（在樣品處理區進(jìn)行，冰上操作。
按陰性質(zhì)控品、待測樣品、陽(yáng)性質(zhì)控品的加樣順序，分別取5μL，加入至已分裝擴增反應液的八聯(lián)管中，反應總體系為25μL。蓋緊管蓋，短暫離心后置于熒光定量PCR儀中，并記錄樣本擺放順序。
4. 擴增反應（在擴增區進(jìn)行）
選擇FAM通道檢測淋球菌核酸，選擇CY5通道檢測內標。按以下擴增程序表設置PCR擴增參數。
步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數 | |
1 | 預變性 | 95℃ | 3min | 1 |
3 | 變性 | 95℃ | 10sec | 45cycle |
4 | 退火延伸及熒光檢測 | 60℃ | 30 sec | |
報告熒光：FAM、CY5；淬滅熒光：NONE。 | ||||
5.質(zhì)量控制
FAM通道Ct值 | CY5通道Ct值（內部質(zhì)控品） | |
陰性對照 | UNDET | — |
陽(yáng)性對照 | ≤35 | ≤35 |
以上要求需在同一次實(shí)驗中同時(shí)滿(mǎn)足，否則，本次實(shí)驗無(wú)效，需重新進(jìn)行
6.結果判讀
反應結束自動(dòng)保存結果，根據分析后圖像調節Baseline 的Start 值、End 值以及Threshold 值（可以根據實(shí)際情況自行調整，Start 值可以在3~15、End 值可設在5~20，調整陰性對照的擴增曲線(xiàn)平直或低于閾值線(xiàn)），點(diǎn)擊Analysis 自動(dòng)獲得分析結果，在Report 界面觀(guān)看結果。
試驗結果判斷
FAM通道 | CY5通道 | 結果判定 | |
1 | Ct值>40 | Ct值<35 | 陰性 |
2 | Ct值≤40 | 有或無(wú)擴增曲線(xiàn) | 陽(yáng)性 |
3 | Ct值>40 | Ct值>35 | 復檢：重新取樣檢測 |
【檢驗結果的解釋】
1．實(shí)驗室環(huán)境污染，試劑污染，樣品交叉污染會(huì )出現假陽(yáng)性結果，如陰性對照檢測為陽(yáng)性，則需做進(jìn)一步實(shí)驗來(lái)確認是哪類(lèi)污染。如為試劑污染，需開(kāi)封新的試劑盒再次進(jìn)行實(shí)驗；如為樣品交叉污染，應重復實(shí)驗；如為實(shí)驗室環(huán)境污染，需對實(shí)驗室進(jìn)行徹底清潔或更換實(shí)驗室再進(jìn)行實(shí)驗。
2．試劑運輸、保存或配制不當會(huì )引起試劑檢測性能下降，出現假陰性結果。如陽(yáng)性對照檢測為陰性，應開(kāi)封新的試劑盒再進(jìn)行實(shí)驗。
【檢測方法的局限性】
1. 該試劑盒僅為定性產(chǎn)品，不做定量測定。
2. 該試劑盒的檢測結果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應結合其癥狀或體征、病史、其它實(shí)驗室檢查及治療反應等情況綜合考慮。
3. 當樣本的細菌含量低于最低檢出限時(shí)，可能會(huì )出現假陰性。陰性結果僅說(shuō)明提取的核酸濃度低于該試劑盒的檢測極限，但不能完全排除細菌感染的可能。
【產(chǎn)品性能指標】
1.準確性：企業(yè)陽(yáng)性參考品檢測結果全部為陽(yáng)性，陽(yáng)性率為15/15。
2.最低檢測限：該試劑盒最低檢測限為500copies/mL。
【注意事項】
1．請嚴格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請嚴格按照說(shuō)明書(shū)要求在冰上操作。
2．試劑配制建議在試劑配制區進(jìn)行，樣品處理要求在生物安全柜內操作。臨床實(shí)驗室應嚴格按照《醫療機構臨床基因擴增檢驗實(shí)驗室管理辦法》等有關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗室、臨床基因擴增實(shí)驗室的管理規范執行。
3．反應液中的成分對光敏感，應避光保存。反復凍融可能降低試劑盒靈敏度，請按檢測頻次將反應液以適當體積分管保存。
4．反應結束后，擴增管請置于密封袋內丟棄，當日清理，切忌開(kāi)蓋。
5．不同批號試劑請勿混合使用，請在有效期內使用試劑盒。
6. 本品僅用于體外診斷。