- 產(chǎn)品品牌： REAGEN
- 產(chǎn)品貨號： RN100FP
- 產(chǎn)品規格： 50/100T
- 產(chǎn)品適用： 本試劑盒適用于體外定量檢測人血清或血漿樣本中的乙型肝炎病毒核酸（HBV DNA）。
- 產(chǎn)地來(lái)源： 深圳
- 保質(zhì)期： 12個(gè)月
【產(chǎn)品名稱(chēng)】
通用名稱(chēng)：乙型肝炎病毒（HBV）核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)
【包裝規格】
50人份/盒
【預期用途】
本試劑盒適用于體外定量檢測人血清或血漿樣本中的乙型肝炎病毒核酸（HBV DNA）。
【檢驗原理】
本試劑盒采用聚合酶鏈式反應（PCR）結合Taqman技術(shù)，對乙型肝炎病毒（HBV）的特異性DNA核酸片段進(jìn)行熒光PCR定量檢測。
【主要成分】
組分成分 | 50人份/盒 | 主要成分 | |
規格 | 數量 | ||
HBV PCR反應液 |
1020μL /管 | 1管 | 引物、探針、脫氧核糖核苷三磷酸（dNTP）、緩沖體系 |
HBV酶混合液 | 26μL /管 | 1管 | Taq酶、UDG酶 |
HBV內參質(zhì)控品 | 250μL /管 | 1管 | 內標質(zhì)粒 |
強陽(yáng)性質(zhì)控品 | 400μL /管 | 1管 | 滅活的HBV陽(yáng)性血清 |
臨界陽(yáng)性質(zhì)控品 | 400μL /管 | 1管 | 滅活的HBV陽(yáng)性血清 |
陰性質(zhì)控品 | 500μL /管 | 1管 | HBV陰性血清 |
HBV定量標準品1（2.0x106 IU/mL） | 250μL /管 | 1管 | 滅活的HBV陽(yáng)性血清 |
HBV定量標準品2（2.0x105 IU/mL） | 250μL /管 | 1管 | 滅活的HBV陽(yáng)性血清 |
HBV定量標準品3（2.0x104 IU/mL） | 250μL /管 | 1管 | 滅活的HBV陽(yáng)性血清 |
HBV定量標準品4（2.0x103 IU/mL） | 250μL /管 | 1管 | 滅活的HBV陽(yáng)性血清 |
【儲存條件及有效期】
試劑置于-30~-15℃避光保存，有效期為12個(gè)月。本產(chǎn)品反復凍融應不超過(guò)5次。
【適用儀器】
熒光定量PCR儀：ABI 7500熒光PCR儀.；ABI Quantstudio5 ；Gentier 96R；SLAN-96P全自動(dòng)醫用PCR分析系統。
【樣本要求】
1.適用樣本類(lèi)型：人血清或血漿樣本
2.樣本保存與運送：
上述采集的樣本可立即用于檢測，或2-8℃保存（不超過(guò)24小時(shí)），長(cháng)期保存請置于-20℃。標本運送用冰壺加冰或泡沫箱加冰密封進(jìn)行運輸。
【檢驗方法】
1. 樣本處理
將待測樣本、陽(yáng)性定量參考品、陰性參考品、強陽(yáng)性參考品、臨界陽(yáng)性參考品進(jìn)行同步處理。取200ul樣本各加入內參質(zhì)控品5ul,按照核酸提取試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行核酸提取。
2. 試劑配置（在準備區進(jìn)行，與擴增區分開(kāi)，冰上操作）
注：試劑使用前要完全解凍，使用前渦旋混勻，10000 rpm離心5 s，確保試劑完全離心至管底，否則會(huì )出現裝量差異的現象。
若有N個(gè)待檢測樣本，按下表要求進(jìn)行擴增反應液的配制，配制完成后充分震蕩混勻，10000 rpm離心5 s。按每管20 μl分裝至0.2 ml PCR管中，并做好標記，擴增反應液需現配現用。
N人份(μL) | |
PCR反應液 | N×19.5 |
酶混合液 | N×0.5 |
總量 | N×20 |
3. 加樣（在樣品處理區進(jìn)行，冰上操作）
按陰性質(zhì)控品、待測樣品、臨界陽(yáng)性質(zhì)控品、強陽(yáng)性質(zhì)控品和定量標準品的加樣順序，分別取5μL，加入至已分裝擴增反應液的八聯(lián)管中，反應總體系為25μL。蓋緊管蓋，短暫離心后置于熒光定量PCR儀中，并記錄樣本擺放順序。
4. 擴增反應（在擴增區進(jìn)行）
選擇FAM通道檢測乙型肝炎病毒（HBV）核酸，選擇CY5通道檢測內標。按以下擴增程序表設置PCR擴增參數。點(diǎn)擊樣本參數界面，按樣本對應順序設置陰性質(zhì)控（NTC）、陽(yáng)性質(zhì)控以及未知樣本(UNK),陽(yáng)性定量參考品在“樣本類(lèi)型”中選擇“標準”，“標準濃度”中輸入濃度。
步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數 | |
1 | 預變性 | 95℃ | 3min | 1 |
3 | 變性 | 95℃ | 10sec | 45cycle |
4 | 退火延伸及熒光檢測 | 60℃ | 30 sec | |
報告熒光：FAM、CY5；淬滅熒光：NONE。 | ||||
5.質(zhì)量控制
FAM通道Ct值 | CY5通道Ct值（內部質(zhì)控品） | |
陰性質(zhì)控品 | UNDET | ≤35 |
陽(yáng)性質(zhì)控品 | ≤35 | — |
定量標準品 | ≤35 | — |
以上要求需在同一次實(shí)驗中同時(shí)滿(mǎn)足，否則，本次實(shí)驗無(wú)效，需重新進(jìn)行
6.結果判讀
反應結束自動(dòng)保存結果，根據分析后圖像調節Baseline 的Start 值、End 值以及Threshold 值（可以根據實(shí)際情況自行調整，Start 值可以在3~15、End 值可設在5~20，調整陰性對照的擴增曲線(xiàn)平直或低于閾值線(xiàn)），點(diǎn)擊Analysis 自動(dòng)獲得分析結果，在Report 界面觀(guān)看結果，記錄未知樣本數值（C）。
試驗結果判斷
6.1如果FAM通道無(wú)典型擴增曲線(xiàn)或Ct值>40,CY5通道有典型擴增曲線(xiàn)，Ct值<35,則判定陰性；
6.2如果FAM通道無(wú)典型擴增曲線(xiàn)或Ct值>40,CY5通道無(wú)典型擴增曲線(xiàn)或者Ct值>35,則需要重新采樣檢測。
6.3如果FAM通道有典型擴增曲線(xiàn)或Ct值≤40，，則按以下方法判斷：
若樣本C<100,則該樣本的HBV DNA濃度<100IU/mL;
若樣本100<C<5.00E+008,則該樣本的HBV DNA濃度=C IU/mL;
若樣本C>5.00E+008,則該樣品的HBV DNA濃度>5x108IU/mL。如果需要精確定量結果，可將樣品用陰性質(zhì)控品稀釋到線(xiàn)性范圍后再檢測。
【檢驗結果的解釋】
1．實(shí)驗室環(huán)境污染，試劑污染，樣品交叉污染會(huì )出現假陽(yáng)性結果，如陰性對照檢測為陽(yáng)性，則需做進(jìn)一步實(shí)驗來(lái)確認是哪類(lèi)污染。如為試劑污染，需開(kāi)封新的試劑盒再次進(jìn)行實(shí)驗；如為樣品交叉污染，應重復實(shí)驗；如為實(shí)驗室環(huán)境污染，需對實(shí)驗室進(jìn)行徹底清潔或更換實(shí)驗室再進(jìn)行實(shí)驗。
2．試劑運輸、保存或配制不當會(huì )引起試劑檢測性能下降，出現假陰性結果。如陽(yáng)性對照檢測為陰性，應開(kāi)封新的試劑盒再進(jìn)行實(shí)驗。
【檢測方法的局限性】
1. 該試劑盒的檢測結果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應結合其癥狀或體征、病史、其它實(shí)驗室檢查及治療反應等情況綜合考慮。
2. 當樣本的病毒含量低于最低檢出限時(shí)，可能會(huì )出現假陰性。陰性結果僅說(shuō)明提取的核酸濃度低于該試劑盒的檢測極限，但不能完全排除病毒感染的可能。
【產(chǎn)品性能指標】
1.準確性：企業(yè)陽(yáng)性參考品檢測結果全部為陽(yáng)性，陽(yáng)性率為15/15。
2.最低檢測限：該試劑盒最低檢測限為30IU/mL。
3.對不同基因型的覆蓋：本試劑盒對常見(jiàn)的HBV B、C、D型樣本，均可在最低檢出限濃度檢出為陽(yáng)性。
4.臨床特異性：對10份臨床HBV DNA陰性樣本進(jìn)行檢測，結果均為陰性。
5.經(jīng)驗證與下列病原體無(wú)交叉反應：甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、腺病毒、人乳頭瘤病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、水痘帶狀皰疹病毒、人類(lèi)免疫缺陷病毒、戊型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、EB病毒、人巨細胞病毒、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌。
【注意事項】
1．請嚴格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請嚴格按照說(shuō)明書(shū)要求在冰上操作。
2．試劑配制建議在試劑配制區進(jìn)行，樣品處理要求在生物安全柜內操作。臨床實(shí)驗室應嚴格按照《醫療機構臨床基因擴增檢驗實(shí)驗室管理辦法》等有關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗室、臨床基因擴增實(shí)驗室的管理規范執行。
3．反應液中的成分對光敏感，應避光保存。反復凍融可能降低試劑盒靈敏度，請按檢測頻次將反應液以適當體積分管保存。
4．反應結束后，擴增管請置于密封袋內丟棄，當日清理，切忌開(kāi)蓋。
5．不同批號試劑請勿混合使用，請在有效期內使用試劑盒。
6. 本品僅用于體外診斷。